Nährmedien und Probenverarbeitung in der mikrobiologischen Labordiagnostik

Zusammenfassung

Der Text gibt einen Überblick über gängige Nährmedien für Bakterien, Hefen und Pilze sowie deren typische Anwendungen und Inkubationsbedingungen. Außerdem werden die Verarbeitung fester und flüssiger Proben, Anreicherungsmethoden und das Gewinnen von Reinkulturen durch Ausstrich beschrieben. Studierende lernen damit die Grundlagen der mikrobiologischen Laborarbeit.

Kernpunkte

Agar nutritivo ist ein Universalmedium für anspruchslose Mikroorganismen; Sabouraud-Agar eignet sich für Pilze.
SS-Agar, MacConkey-Agar und XLD-Agar dienen dem Nachweis von Salmonellen und Shigellen bzw. coliformen Bakterien bei 37 °C.
Baird-Parker-Agar wird zur Isolierung von Staphylococcus verwendet, Cetrimid-Agar zur Kultur von Pseudomonas.
Urinproben sollten innerhalb von zwei Stunden nach Entnahme verarbeitet und zentrifugiert werden.
Anreicherung erfolgt physikalisch über Temperatur (Psychrophile bei 0–5 °C, Thermophile über 55 °C) oder chemisch über selektive Zusätze wie Natriumselenit oder Gallensalze.
Eine Reinkultur entsteht durch Erschöpfungsausstrich oder Verdünnungsverfahren, da eine Kolonie aus einer einzelnen Zelle hervorgeht.

Stellen Sie sich auf die Probe

Nährmedien für Mikroorganismen

Agar nutritivo: Für anspruchslose Mikroorganismen.
Peptonwasser: Flüssiges Medium zur nicht-selektiven Isolierung von Bakterien. Inkubation: 18 Stunden bei 37 °C.
Blutagar (pH 6,8): Isolierung, Kultivierung und Identifizierung verschiedener Bakterien.
Kartoffel-Dextrose-Agar: Kultivierung, Isolierung und Bestimmung der Anzahl von Hefen und Schimmelpilzen. Inkubation: Bis zu 5 Tage bei Raumtemperatur.
Sabouraud-Agar: Klares Nährmedium für Pilze, empfohlen für Dermatophyten und Empfindlichkeitstests.
SS-Agar (Salmonella-Shigella): Stimuliert das Wachstum von Salmonellen und Shigellen. Inkubation: 18-24 Stunden bei 37 °C.
MacConkey-Agar: Isolierung von Salmonellen, Shigellen und coliformen Bakterien. Inkubation: 18-24 Stunden bei 37 °C.
XLD-Agar: Isolierung und Differenzierung von pathogenen Enterobacteriaceae, Shigellen und Salmonellen. Inkubation: 48 Stunden bei 37 °C.
Baird-Parker-Agar: Isolierung von Staphylococcus. Inkubation: 24-48 Stunden bei 37 °C.
Cetrimid-Agar: Kultur für Pseudomonas. Inkubation: Bis zu 48 Stunden bei 42 °C.
Zuckerhaltige Medien mit pH-Indikatoren: Untersuchung fermentativer Eigenschaften.
Kligler-Agar: Identifizierung von Enterobacteriaceae. Inkubation: 48 Stunden bei 37 °C.
Citrat-Agar: Identifizierung von Enterobacteriaceae. Inkubation: 24-48 Stunden bei 37 °C.
MR-VP-Bouillon: Biochemische Differenzierung der Coli-aerogenes-Gruppe. Inkubation: Bis zu 4 Tage bei 37 °C.
Laktose-Bouillon: Nachweis von Escherichia coli durch Gasbildung. Inkubationszeit: 24-48 Stunden bei 37 °C.

Probenverarbeitung

Feste Proben

Knochen/Gewebe: Oberfläche mit Spatel abkratzen oder Gewebestücke in Kochsalzlösung zerkleinern.
Haare und Schuppen: Identifizierung von Pilzen mittels Lactophenol-Technik.
Anaerobe Sporenbildner: Gewebe zerkleinern, suspendieren und 30-60 Minuten bei 80 °C erhitzen.

Flüssige Proben

Abszesse/Ohrsekret: In Kochsalzlösung aufnehmen.
Sputum: Dekontaminierung in Kochsalzlösung.
Urin: Zentrifugation bei 1500 U/min, innerhalb von zwei Stunden nach Entnahme verarbeiten.
Blut: Verwendung von Gerinnungshemmern.
Darminhalt: Zentrifugation.

Anreicherungsmethoden

Physikalische Methoden

Niedrige Temperatur: 0-5 °C für Psychrophile.
Hohe Temperatur: Über 55 °C für Thermophile.
Sporenabtötung: 80 °C zur Selektion.

Chemische Methoden

Laktobazillen: MRS-Bouillon (pH 5,5-6,5).
Salmonellen: Natriumselenit (0,4 %).
Staphylococcus: NaCl-Anreicherung und Baird-Parker-Agar.
Antibiotika: Selektion durch Zusätze wie Penicillin.
Galle: Gallensalze für Darmbakterien.

Isolierung und Identifizierung

Ziel ist die Gewinnung von Reinkulturen durch Ausstrich auf festen Nährmedien. Eine Kolonie gilt als Nachkomme einer einzelnen Zelle.

Mechanische Methoden

Ausstrichmethode: Erschöpfungsausstrich im Zick-Zack.
Verdünnungs- und Aussaatverfahren: Gleichmäßige Verteilung zur Trennung von Kolonien.

Laborausstattung

Verwendet werden unter anderem Petrischalen, Reagenzgläser, Zentrifugen, Pipetten, Drigalsky-Spatel, Erlenmeyerkolben, Kitasato-Flaschen, Objektträger, Durham-Röhrchen, Impfösen und Bunsenbrenner zur Sterilisation.

Häufige Fragen

Welches Nährmedium eignet sich zur Isolierung von Staphylococcus?

Zur Isolierung von Staphylococcus wird Baird-Parker-Agar verwendet. Die Inkubation erfolgt 24–48 Stunden bei 37 °C.

Wie wird Urin für die mikrobiologische Untersuchung verarbeitet?

Der Urin wird innerhalb von zwei Stunden nach Entnahme bei 1500 U/min zentrifugiert. Anschließend wird das Sediment weiterverarbeitet.

Wofür wird Sabouraud-Agar eingesetzt?

Sabouraud-Agar ist ein klares Nährmedium für Pilze und wird besonders für Dermatophyten und Empfindlichkeitstests empfohlen.