Mikrobiologische Labormethoden und Nährmedien

Nährmedien für Mikroorganismen

• Agar nutritivo: Für anspruchslose Mikroorganismen.
• Peptonwasser: Flüssiges Medium zur nicht-selektiven Isolierung von Bakterien. Inkubation: 18 Stunden bei 37 °C.
• Blutagar (pH 6,8): Isolierung, Kultivierung und Identifizierung verschiedener Bakterien.
• Kartoffel-Dextrose-Agar: Kultivierung, Isolierung und Bestimmung der Anzahl von Hefen und Schimmelpilzen. Inkubation: Bis zu 5 Tage bei Raumtemperatur.
• Sabouraud-Agar: Klares Nährmedium für Pilze, empfohlen für Dermatophyten und Empfindlichkeitstests.
• SS-Agar (Salmonella-Shigella): Stimuliert das Wachstum von Salmonellen und Shigellen. Inkubation: 18-24 Stunden bei 37 °C.
• MacConkey-Agar: Isolierung von Salmonellen, Shigellen und coliformen Bakterien. Inkubation: 18-24 Stunden bei 37 °C.
• XLD-Agar: Isolierung und Differenzierung von pathogenen Enterobacteriaceae, Shigellen und Salmonellen. Inkubation: 48 Stunden bei 37 °C.
• Baird-Parker-Agar: Isolierung von Staphylococcus. Inkubation: 24-48 Stunden bei 37 °C.
• Cetrimid-Agar: Kultur für Pseudomonas. Inkubation: Bis zu 48 Stunden bei 42 °C.
• Zuckerhaltige Medien mit pH-Indikatoren: Untersuchung fermentativer Eigenschaften.
• Kligler-Agar: Identifizierung von Enterobacteriaceae. Inkubation: 48 Stunden bei 37 °C.
• Citrat-Agar: Identifizierung von Enterobacteriaceae. Inkubation: 24-48 Stunden bei 37 °C.
• MR-VP-Bouillon: Biochemische Differenzierung der Coli-aerogenes-Gruppe. Inkubation: Bis zu 4 Tage bei 37 °C.
• Laktose-Bouillon: Nachweis von Escherichia coli durch Gasbildung. Inkubationszeit: 24-48 Stunden bei 37 °C.

Probenverarbeitung

Feste Proben

• Knochen/Gewebe: Oberfläche mit Spatel abkratzen oder Gewebestücke in Kochsalzlösung zerkleinern.
• Haare und Schuppen: Identifizierung von Pilzen mittels Lactophenol-Technik.
• Anaerobe Sporenbildner: Gewebe zerkleinern, suspendieren und 30-60 Minuten bei 80 °C erhitzen.

Flüssige Proben

• Abszesse/Ohrsekret: In Kochsalzlösung aufnehmen.
• Sputum: Dekontaminierung in Kochsalzlösung.
• Urin: Zentrifugation bei 1500 U/min, innerhalb von zwei Stunden nach Entnahme verarbeiten.
• Blut: Verwendung von Gerinnungshemmern.
• Darminhalt: Zentrifugation.

Anreicherungsmethoden

Physikalische Methoden

• Niedrige Temperatur: 0-5 °C für Psychrophile.
• Hohe Temperatur: Über 55 °C für Thermophile.
• Sporenabtötung: 80 °C zur Selektion.

Chemische Methoden

• Laktobazillen: MRS-Bouillon (pH 5,5-6,5).
• Salmonellen: Natriumselenit (0,4 %).
• Staphylococcus: NaCl-Anreicherung und Baird-Parker-Agar.
• Antibiotika: Selektion durch Zusätze wie Penicillin.
• Galle: Gallensalze für Darmbakterien.

Isolierung und Identifizierung

Ziel ist die Gewinnung von Reinkulturen durch Ausstrich auf festen Nährmedien. Eine Kolonie gilt als Nachkomme einer einzelnen Zelle.

Mechanische Methoden

• Ausstrichmethode: Erschöpfungsausstrich im Zick-Zack.
• Verdünnungs- und Aussaatverfahren: Gleichmäßige Verteilung zur Trennung von Kolonien.

Laborausstattung

Verwendet werden unter anderem Petrischalen, Reagenzgläser, Zentrifugen, Pipetten, Drigalsky-Spatel, Erlenmeyerkolben, Kitasato-Flaschen, Objektträger, Durham-Röhrchen, Impfösen und Bunsenbrenner zur Sterilisation.